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對于耐藥細胞株的培養(yǎng)方法你了解多少?

更新時間:2022-01-18點擊次數(shù):2413
  耐藥細胞株在長期保存和傳代過程中受到各種不穩(wěn)定因素的影響,例如,細胞遺傳污染和基因變異。因此,經(jīng)過一段時間后,細胞的遺傳物質(zhì)可能發(fā)生變化,導(dǎo)致其生物學(xué)特性發(fā)生變化,從而降低動物模型的一致性和可比性。因此,為了保證動物模型的穩(wěn)定性,必須對細胞株的質(zhì)量進行監(jiān)測。那么你對它的培養(yǎng)方法了解多少?
  所有轉(zhuǎn)染腫瘤和病毒的細胞都被認為具有潛在的生物危害,必須在二級生物安全平臺上操作,請注意防護。所有與該單元接觸的廢液和容器只能在高壓滅菌后丟棄。收到耐藥細胞株后,用倒置透鏡觀察整個細胞的生長情況。

 

耐藥細胞株
 

 

  1、若細胞未滿,用75%酒精噴整瓶消毒,放入超級菌臺,嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)基,繼續(xù)換10ml新鮮培養(yǎng)基后培養(yǎng)。
  2、如果細胞滿了,可以傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
 ?。?)棄去培養(yǎng)基,用PBS(不包括鈣和鎂離子)洗滌1-2次。
 ?。?)在培養(yǎng)瓶中加入1ml消化液,倒置在37℃培養(yǎng)箱中預(yù)熱1-3分鐘,然后將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)10-30秒,觀察倒置顯微鏡下的細胞消化。如果大部分細胞變成圓形,迅速收回控制臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶,然后加入少量*培養(yǎng)基終止消化。
  (3)按6-8ml/瓶加入*培養(yǎng)基,輕輕打勻,吸出一半,分裝到新的培養(yǎng)瓶中。除非另有說明,接受細胞后的繼代培養(yǎng)一般為一到二。
  耐藥細胞株的培養(yǎng)注意事項:
  1、細胞在低倍鏡(4倍或5倍物鏡)下觀察,否則無法準確判斷細胞的傳代密度。要查看細胞的形態(tài),請使用10x或20x物鏡。
  2、瓶內(nèi)運輸介質(zhì)不可重復(fù)使用。請使用具有雙抗體的新培養(yǎng)基。細胞冷凍后,培養(yǎng)基不得添加任何抗生素。
  3、有些細胞沒有牢固地貼在墻上。如果發(fā)現(xiàn)貼壁細胞脫落,可以離心吹干后接種到新瓶中。
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