產(chǎn)品展示
當(dāng)前位置:首頁(yè)產(chǎn)品展示技術(shù)服務(wù)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞傳代培養(yǎng)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:細(xì)胞傳代培養(yǎng):根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法。貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞用消化法傳代;部分貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞用直接吹打可傳代;懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打傳代。
產(chǎn)品型號(hào):
更新時(shí)間:2024-07-18
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
訪 問(wèn) 量 :1728
021-51216810
產(chǎn)品分類
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根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的恃點(diǎn),細(xì)胞傳代培養(yǎng)方法有3種:貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞傳代、半懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代(Hela細(xì)胞)、懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代。
◆ 貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞用消化法傳代;
◆ 部分貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞用直接吹打可傳代;
◆ 懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打傳代。
實(shí)驗(yàn)材料:細(xì)胞、D-Hanks液、胎牛血清、DMEM培養(yǎng)基 / RPMI1640培養(yǎng)基、Penicillin-Streptomycin(P/S雙抗)、胰蛋白酶
儀器與耗材:凈化工作臺(tái)、離心機(jī)、恒溫水浴箱、冰箱、倒置相差顯微鏡、培養(yǎng)箱、玻璃瓶、細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿、廢液缸、離心管、紅血球計(jì)數(shù)板、不同規(guī)格的移液器及其配套的無(wú)菌吸頭、吸管
1. 貼壁細(xì)胞的消化法傳代:
1)先吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。
2)D-Hanks液洗2~3次。
3)向瓶?jī)?nèi)加入適量消化液(胰蛋白酶或與EDTA混合液)輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶,使消化液流遍所有細(xì)胞表面。(注意:胰蛋白酶要預(yù)溫,溫度37℃左右為宜。)
4)消化最好在37℃環(huán)境下進(jìn)行,消化2~5 min 后把培養(yǎng)瓶放置顯微鏡下進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮,細(xì)胞間隙增大后,應(yīng)立即終止消化。
5)吸除或倒掉消化液,如用EDTA消化,需加Hanks液數(shù)毫升,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶把殘留消化液沖掉,再添加培養(yǎng)液。如僅用胰蛋白酶可直接加少許含血清的培養(yǎng)液,終止消化。
6)用彎頭吸管,吸取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液,反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞。從培養(yǎng)瓶底部一邊開(kāi)始到另一邊結(jié)束,以確保所有底部都被吹到,使細(xì)胞脫離瓶壁后形成細(xì)胞懸液。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔,不要用力過(guò)猛。
7) 細(xì)胞計(jì)數(shù)后分別接種在新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。
8)置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(注意:要定時(shí)觀察細(xì)胞,如發(fā)現(xiàn)污染,應(yīng)及時(shí)處理。)
2. 懸浮細(xì)胞的傳代:懸浮細(xì)胞傳代可離心收集細(xì)胞后傳代,或直接傳代。
離心傳代法:
1) 將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到15 ml 離心管內(nèi)。
2) 800~1000 rpm離心5 min。(注意:離心轉(zhuǎn)速要合適。轉(zhuǎn)速過(guò)低,不能有效分離細(xì)胞;離心速度過(guò)大,時(shí)間過(guò)長(zhǎng),會(huì)擠壓細(xì)胞造成損傷甚至死亡。)
3) 棄去上清,加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi),用吸管吹打形成細(xì)胞懸液。
4) 計(jì)數(shù),分別接種在新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。
直接傳代法:
讓?xiě)腋〖?xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清液吸掉1/2~2/3,然后用吸管吹打形成細(xì)胞懸液后再傳代。
3. 部分貼壁細(xì)胞的傳代
1)部分貼壁不牢的細(xì)胞,如Hela細(xì)胞等,不經(jīng)消化處理直接吹打可使細(xì)胞從壁上脫落下來(lái),而進(jìn)行傳代。
2)對(duì)絕大部分貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,因直接吹打?qū)?xì)胞損傷較大,細(xì)胞常有較大數(shù)量的丟失,因而需消化后,才能吹打傳代。
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